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產(chǎn)品快訊：過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒
規(guī)格：50T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
產(chǎn)品內(nèi)容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存;
試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存;
試劑二：液體 0.33mL×2 瓶，4℃保存;用時每瓶加入5mL 試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;
試劑三：液體 10 mL×1 瓶，4℃保存。
產(chǎn)品說明：
POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，可催化*氧化酚類和胺類化合物，具有消除*和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物， 在470nm有特征光吸收。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水
過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、 細菌、細胞或組織樣品的制備：
細菌或培養(yǎng)細胞：先收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104 個)：提取液體積(mL)為 500~1000：1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL 提取液)，超聲波破碎細菌或細胞(冰浴，功率 20%或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量(g)：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織，加入
1mL 提取液)，進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
2、 血清(漿)樣品：直接檢測。二、測定步驟：
1、分光光度計預(yù)熱30min 以上，調(diào)節(jié)波長至470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、測定前將試劑一、二和三 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)放置10min。
3、樣本測定表
試劑名稱(µL)測定管
樣本15
蒸餾水270
試劑一520
試劑二130
試劑三135
在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計時，記錄470nm下30s 時的吸光值
A1和1min30s后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA=A2-A1。
注意：
a.若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在 37℃(哺乳動物) 或 25℃(其它物種)放置10min 以上，測定時加入15µL 樣本和1055µL 混合液測定。
b.如果ΔA 小于0.005，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA 大于0.5，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
三、POD 活性計算：
1、 血清(漿)POD 活性
單位定義：每mL血清(漿)在每mL 反應(yīng)體系中每分鐘A470 變化0.01 為一個酶活力單位。計算公式：POD(U/mL)=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =7133×ΔA
2、 組織、細菌或細胞 POD 活性
(1)按樣本蛋白濃度計算
單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W
(3)按細菌或細胞數(shù)量計算
單位定義：每1萬個細菌或細胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘 A470 變化0.01為一個酶活力單位。
POD(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V 樣總)÷0.01÷T=14.27×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.07mL;V樣：加入樣本體積，0.015mL;V樣總：加入提取液體積，1mL;T：反應(yīng)時間，1min;Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL;W：樣本鮮重，g;500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。
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