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以下是關(guān)于大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒的實驗使用說明綜合整理：
BS-3649 大鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法檢測樣本中HMGB-1含量。通過包被抗體捕獲目標(biāo)蛋白后，依次加入檢測抗體和酶標(biāo)記物形成復(fù)合物，最終通過TMB顯色反應(yīng)測定濃度?。
二、樣本處理要求
血清?：室溫凝固10-20分鐘后2000-3000rpm離心20分鐘?
血漿?：需使用EDTA/檸檬酸鈉抗凝，離心后取上清?
組織勻漿?：按重量加入PBS勻漿后離心?
保存條件?：建議分裝凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融?
三、試劑盒組成
包含包被板、標(biāo)準(zhǔn)品(濃度通常為0-160μg/L)、生物素標(biāo)記抗體、鏈霉親和素-HRP、顯色液(TMB)及終止液等?。不同規(guī)格試劑盒組分體積存在差異(如48孔/96孔配置)?。
四、操作步驟
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋?：按說明書梯度稀釋?
加樣順序?：依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本→檢測抗體→酶結(jié)合物?
溫育條件?：37℃反應(yīng)，具體時間參照不同試劑盒要求(通常30-60分鐘)?
顯色終止?：加入TMB顯色15分鐘后加終止液?
五、注意事項
濃縮洗滌液需1:20稀釋，使用前需溶解結(jié)晶?
避免底物接觸金屬器械，顯色后需立即檢測OD值?
計算結(jié)果時需注意樣本稀釋倍數(shù)(通常需×5)?
六、結(jié)果計算
在450nm波長下測定OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度?。建議使用專業(yè)酶標(biāo)儀分析?。
注：不同品牌試劑盒可能存在參數(shù)差異，請以實際說明書為準(zhǔn)?。
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